R-Spondin2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-433683

Descripción general

Rspo2 codifica R-Spondin2, un ligando matricelular secretado que potencia la señalización canónica WNT/β-catenina al unirse a receptores LGR y neutralizar el recambio de los receptores Frizzled mediado por RNF43/ZNRF3. En tejidos de ratón, R-Spondin2 contribuye al patrón del desarrollo, al mantenimiento de células madre/progenitoras y a la señalización epitelio–mesénquima, influyendo en procesos como la organogénesis, la remodelación tisular y la regeneración. Su actividad converge con vías que controlan la proliferación y la diferenciación, incluidos programas transcripcionales impulsados por WNT y gradientes de morfógenos dependientes de la matriz extracelular. La desregulación de la señalización RSPO2–WNT se estudia con frecuencia en contextos de crecimiento y diferenciación tisular aberrantes, incluidos modelos de defectos del desarrollo y de activación de vías oncogénicas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO R-Spondin2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rspo2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rspo2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rspo2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína R-Spondin2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rspo2 para la investigación de la señalización de R-Spondin2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rspo2 críticos para la función de R-Spondin2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rspo2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido R-Spondin2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido R-Spondin2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rspo2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR R-Spondin2 (m) y el plásmido HDR R-Spondin2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rspo2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rspo2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.