Plásmido CRISPR de Activación (h) R-Ras: sc-402126-ACT

RRAS codifica la pequeña GTPasa R-Ras, un nodo de señalización de la familia Ras que alterna entre estados unidos a GDP y a GTP para regular la adhesión dependiente de integrinas, la dinámica del citoesqueleto y el tráfico de membrana. En células humanas, R-Ras contribuye al control de la migración celular y de la señalización de supervivencia a través de vías que convergen con las cascadas PI3K/AKT y MAPK, influyendo en el comportamiento de células endoteliales y de músculo liso. La actividad alterada de RRAS se ha asociado con un remodelado vascular desregulado y con programas aberrantes de motilidad celular observados en cáncer y trastornos del desarrollo. Estas propiedades hacen de RRAS una diana útil para analizar la señalización mediada por adhesión, los fenotipos de invasión y el cableado específico de contexto de las redes Ras.

R-Ras El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RRAS sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

R-Ras El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RRAS en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RRAS, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de R-Ras. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RRAS y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de R-Ras en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía R-Ras en células tumorales con expresión de RRAS silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.