QTRT1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-413456

Descripción general

QTRT1 codifica la subunidad catalítica de la transglicosilasa de tRNA-guanina, una enzima necesaria para la modificación con queuosina en la posición wobble de determinados tRNA citosólicos. Este proceso de edición del tRNA favorece la precisión y la eficiencia de la traducción, influyendo en la síntesis proteica sesgada por codones, la proteostasis y un metabolismo del ARN más amplio. A través de su papel en el mantenimiento de la homeostasis de las modificaciones del tRNA, QTRT1 vincula el rescate de queuina dependiente de nutrientes con las respuestas celulares al estrés y las vías de control del crecimiento. La desregulación de las modificaciones del tRNA y de la maquinaria de traducción se ha asociado con fenotipos relevantes para la función mitocondrial, la sensibilidad al estrés oxidativo y programas proliferativos, lo que convierte a QTRT1 en un nodo útil para estudios mecanísticos de la biología de las modificaciones del ARN.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO QTRT1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen QTRT1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del QTRT1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de QTRT1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína QTRT1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en QTRT1 para la investigación de la señalización de QTRT1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de QTRT1 críticos para la función de QTRT1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de QTRT1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido QTRT1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido QTRT1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus QTRT1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR QTRT1 (h) y el plásmido HDR QTRT1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología QTRT1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana QTRT1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.