Puratrophin 1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-411825

Descripción general

PLEKHG4 codifica Puratrophin 1, una proteína multidominio implicada en la regulación neuronal y del citoesqueleto a través de la señalización de GTPasas de la familia Rho. Como proteína putativa relacionada con los factores de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) de Rho, se vincula con la modulación de la dinámica de actina, el tráfico de membranas y la arquitectura de las neuritas, procesos centrales para el mantenimiento sináptico y el transporte intracelular. La expresión de PLEKHG4 está enriquecida en el sistema nervioso, lo que respalda funciones en el desarrollo neuronal y la estabilidad de los circuitos. La variación genética y la alteración funcional de Puratrophin 1 se han asociado con fenotipos neurodegenerativos y trastornos del movimiento, incluida la ataxia espinocerebelosa, lo que impulsa estudios mecanísticos en modelos celulares relevantes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Puratrophin 1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PLEKHG4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PLEKHG4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PLEKHG4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Puratrophin 1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PLEKHG4 para la investigación de la señalización de Puratrophin 1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PLEKHG4 críticos para la función de Puratrophin 1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PLEKHG4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Puratrophin 1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Puratrophin 1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PLEKHG4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Puratrophin 1 (h) y el plásmido HDR Puratrophin 1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PLEKHG4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PLEKHG4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.