Plasmide CRISPR d'Activation (h) PTH: sc-401280-ACT

Le gène PTH humain code l’hormone parathyroïdienne, un peptide endocrinien qui maintient l’homéostasie du calcium et du phosphate en agissant sur l’os et le rein, en coordination avec le métabolisme de la vitamine D. La signalisation de la PTH mobilise des voies dépendantes de PTH1R, notamment cAMP/PKA et PLC, afin de moduler le couplage ostéoblastes/ostéoclastes, la réabsorption tubulaire rénale et la gestion du phosphate, intégrant l’équilibre minéral systémique au remodelage squelettique. Une expression ou une sécrétion dérégulée de la PTH est associée à des perturbations du métabolisme minéral et du remodelage osseux, notamment des phénotypes liés à l’hyperparathyroïdie et à l’hypoparathyroïdie, faisant de la PTH un nœud central pour l’étude du contrôle endocrinien de la physiologie musculo-squelettique.

PTH Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PTH sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PTH Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PTH dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PTH, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PTH. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PTH natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PTH au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PTH dans les cellules tumorales présentant une expression de PTH silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.