PSPH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403897

Übersicht

Phosphoserin-Phosphatase (PSPH) katalysiert den letzten Schritt des phosphorylierten Serin-Biosynthesewegs, indem sie O-Phospho-L-Serin in L-Serin und anorganisches Phosphat umwandelt. Durch die Kontrolle der intrazellulären Serinverfügbarkeit unterstützt PSPH den Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel und die Nukleotidsynthese, die Aufrechterhaltung des Redoxgleichgewichts über die Glutathionproduktion sowie die Lipidsynthese und verknüpft damit den Aminosäurestoffwechsel mit Proliferations- und Stressantwortprogrammen. Die PSPH-Aktivität ist mit der metabolischen Umprogrammierung verknüpft, wie sie in schnell proliferierenden Zellen beobachtet wird, und wird häufig zusammen mit PHGDH und PSAT1 innerhalb der Serin-Glycin-Achse untersucht. Eine dysregulierte Expression von PSPH wurde mit veränderten metabolischen Phänotypen bei Krebs und anderen Erkrankungen in Verbindung gebracht, die durch einen gestörten Aminosäure- und Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel gekennzeichnet sind, was PSPH für mechanistische Studien zur metabolischen Verwundbarkeit relevant macht.

Das PSPH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PSPH-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PSPH-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PSPH nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PSPH-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PSPH-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PSPH-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PSPH-Exone abzielen, die für die PSPH-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PSPH-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PSPH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PSPH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PSPH-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PSPH HDR-Plasmid (h) und PSPH HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PSPH-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PSPH-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.