Plásmido Doble Nickase (h) PSM: sc-401947-NIC

FOLH1 codifica el antígeno de membrana específico de próstata (PSMA), una metaloproteptidasa transmembrana de tipo II con actividad de hidrolasa de folatos y NAALADasa que regula la disponibilidad extracelular de glutamato y el metabolismo del folato. En tejidos humanos, PSMA contribuye al procesamiento de nutrientes y a la señalización al escindir folatos poliglutamados y neuropéptidos, lo que la vincula con el manejo de aminoácidos y la comunicación metabólica en la superficie celular. La expresión y actividad de FOLH1/PSMA se estudian con frecuencia en contextos epiteliales y neuronales, donde los cambios pueden influir en la adhesión celular, la migración y la señalización del microambiente. La biología desregulada de FOLH1 se investiga a menudo en relación con programas oncogénicos y la neurobiología, lo que la convierte en un locus útil para analizar la función de enzimas de membrana y los efectos posteriores en las vías de señalización.

PSM El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FOLH1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FOLH1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FOLH1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FOLH1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.