Protein S Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401491

Descripción general

PROS1 codifica la proteína S, una glucoproteína dependiente de la vitamina K que actúa como un cofactor anticoagulante clave de la proteína C activada, promoviendo la inactivación proteolítica de los factores Va y VIIIa y limitando la generación de trombina. Más allá de su función en la cascada de coagulación, la proteína S también actúa como ligando de las tirosina quinasas receptoras TAM (TYRO3, AXL, MERTK), favoreciendo la eferocitosis dependiente de fosfatidilserina y la modulación de la señalización inmunitaria innata. A través de estas vías, PROS1 vincula la hemostasia con la homeostasis inflamatoria y la eliminación de células apoptóticas. La deficiencia genética o la actividad reducida de la proteína S se asocia con una coagulación desregulada y una predisposición trombótica, y la alteración de la señalización TAM se ha relacionado con disfunción inmunitaria y fenotipos del microambiente asociados al cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Protein S (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PROS1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PROS1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PROS1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Protein S.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PROS1 para la investigación de la señalización de Protein S, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PROS1 críticos para la función de Protein S
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PROS1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Protein S CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Protein S CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PROS1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Protein S (h) y el plásmido HDR Protein S (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PROS1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PROS1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.