proglucagon CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416721-ACT

ヒトのGCGはプログルカゴンをコードしており、プログルカゴンは組織特異的にプロセシングされて、膵臓のα細胞ではグルカゴンが、腸管L細胞や一部のニューロンではGLP-1やGLP-2などのインクレチンペプチドが産生されます。これらのペプチドは、肝臓での糖放出、インスリン分泌、食欲シグナル、腸管成長の調節を通じて全身のエネルギーバランスを協調的に制御し、GCGを内分泌・代謝恒常性と結び付けています。プログルカゴン由来ホルモンは主にGPCR経路を介してシグナル伝達し、cAMP/PKAおよびCREB依存性の転写プログラムを作動させることで、栄養状態のセンシングとホルモン応答を統合します。プログルカゴンのプロセシングやシグナル伝達が破綻すると、糖代謝調節の障害や、より広範な代謝疾患の表現型と関連するため、GCGは膵島生物学および腸–膵内分泌軸を研究するうえで重要な結節点となります。

proglucagon CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GCGの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

proglucagon CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GCG 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGCG転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性proglucagonの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGCG遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるproglucagon依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGCG発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるproglucagon経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。