Prealbumin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401083

Übersicht

Das humane **TTR**-Gen kodiert Prealbumin (Transthyretin), ein sezerniertes, tetrameres Transportprotein, das Thyroxin (T4) sowie Retinol durch Bindung an das Retinol-bindende Protein transportiert und damit die endokrine Hormonverteilung und die Vitamin‑A‑Homöostase unterstützt. Prealbumin wird überwiegend von Hepatozyten synthetisiert und zudem im Plexus choroideus exprimiert, wodurch es zum Protein- und Hormontransport zwischen Blutplasma- und Liquor-Kompartimenten beiträgt. Seine Biologie berührt die Proteostase des sekretorischen Wegs, den extrazellulären Proteinumsatz und Ligandenbindungs-Dynamiken, die systemische metabolische Signalwege beeinflussen. Eine dysregulierte Faltung und Aggregation von TTR ist mit Amyloidablagerungs-Erkrankungen verknüpft, während veränderte Expression oder Stabilität für Untersuchungen der Leberfunktion, des Umgangs mit Schilddrüsenhormonen und der Mechanismen von Proteinfehlfaltung informativ sein kann.

Das Prealbumin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TTR-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TTR-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TTR nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Prealbumin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TTR-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Prealbumin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TTR-Exone abzielen, die für die Prealbumin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TTR-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Prealbumin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Prealbumin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TTR-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Prealbumin HDR-Plasmid (h) und Prealbumin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TTR-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TTR-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.