Plásmido CRISPR de Activación (h) PP2Cα: sc-403960-ACT

PPM1A codifica la fosfatasa de serina/treonina PP2Cα, un miembro de la familia PP2C dependiente de Mg²⁺/Mn²⁺ que contrarresta la señalización de quinasas activadas por estrés mediante la desfosforilación de componentes clave de la vía. PP2Cα modula las respuestas celulares a estímulos genotóxicos e inflamatorios, con funciones descritas en la regulación de las cascadas MAPK, de las salidas de señalización vinculadas a NF-κB y del control de los puntos de control del ciclo celular. Al ajustar los umbrales de señalización dependientes de la fosforilación, PPM1A influye en la apoptosis, la diferenciación y los programas de inmunidad innata. La actividad o expresión desregulada de PP2Cα se ha asociado con una adaptación al estrés alterada y con fenotipos de señalización observados en múltiples contextos relevantes para enfermedad, incluida la biología del cáncer y patologías relacionadas con el sistema inmunitario.

PP2Cα El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PPM1A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PP2Cα El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PPM1A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PPM1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PP2Cα. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PPM1A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PP2Cα en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PP2Cα en células tumorales con expresión de PPM1A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.