POPX2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406536

Descripción general

PPM1F codifica la fosfatasa de proteínas de serina/treonina POPX2 (familia PP2C), un regulador de la señalización dependiente de fosforilación que contrarresta las vías de quinasas que controlan la dinámica del citoesqueleto y los procesos asociados al ciclo celular. POPX2 se ha relacionado con la modulación de la remodelación de actina y la motilidad celular mediante la desfosforilación de sustratos selectos dentro de redes acopladas a GTPasas Rho y sensibles al estrés, integrando señales que influyen en la adhesión y la migración direccional. Al ajustar estos nodos de señalización, POPX2 puede moldear respuestas celulares como la proliferación, la supervivencia y el comportamiento invasivo en sistemas modelo. Se han descrito actividad fosfatasa desregulada y expresión alterada de PPM1F/POPX2 en contextos relevantes para la biología del cáncer y otros trastornos en los que una señalización de fosforilación aberrante perturba la homeostasis tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO POPX2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PPM1F en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PPM1F junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PPM1F tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína POPX2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PPM1F para la investigación de la señalización de POPX2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PPM1F críticos para la función de POPX2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PPM1F para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido POPX2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido POPX2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PPM1F. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR POPX2 (h) y el plásmido HDR POPX2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PPM1F para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PPM1F definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.