POMC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400592-ACT

ヒトPOMCはプロオピオメラノコルチン（proopiomelanocortin）をコードしており、これは神経内分泌系のプロホルモンで、タンパク質分解的なプロセシングを受けてACTHやメラノサイト刺激ホルモン（MSH）など複数の生理活性ペプチドに変換されます。これらのペプチドはメラノコルチン受容体を介してシグナルを伝え、視床下部による食欲およびエネルギーバランスの制御、下垂体—副腎軸の活動の協調、さらに色素形成やストレス応答に影響を与えます。POMCの発現とペプチドのプロセシングは、cAMP/PKAにより駆動される転写プログラムと、分泌経路におけるプロホルモン変換酵素（prohormone convertase）依存的な成熟過程と密接に連動して厳密に制御されています。POMC経路の制御異常は、エネルギー恒常性、副腎機能、色素生物学に関わる疾患と関連しており、神経内分泌シグナル伝達の作用機序研究における中心的な標的となっています。

POMC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性POMCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

POMC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における POMC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPOMC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性POMCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPOMC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPOMC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPOMC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPOMC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。