Plasmide CRISPR/Cas9 KO Pol I/II/III RPB8 (h): sc-406520

Présentation

POLR2H code pour RPB8, une petite sous-unité conservée, commune aux ARN polymérases I, II et III, qui contribue à l’assemblage et à la stabilité de la polymérase ainsi qu’à sa compétence transcriptionnelle. Par sa participation à la synthèse des ARNr (Pol I), à la transcription des ARNm (Pol II) et à la production des ARNt/ARNr 5S (Pol III), RPB8 soutient des programmes fondamentaux d’expression génique qui couplent la transcription à la biogenèse des ribosomes, au contrôle du cycle cellulaire et à la protéostasie. Une activité altérée de la machinerie transcriptionnelle basale et des voies de stress nucléolaire peut remodeler la production globale de transcrits et la signalisation en aval, faisant de POLR2H un nœud utile pour étudier les vulnérabilités transcriptionnelles et la reconfiguration de l’expression à l’échelle du génome dans des contextes pertinents pour la maladie. Son rôle essentiel, partagé entre plusieurs polymérases, offre également un levier mécanistique pour analyser comment les facteurs généraux de transcription et les états de la chromatine se coordonnent entre les différents systèmes de polymérases.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Pol I/II/III RPB8 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène POLR2H dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du POLR2H, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert POLR2H à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Pol I/II/III RPB8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en POLR2H pour l'étude de la signalisation de Pol I/II/III RPB8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de POLR2H essentiels à la fonction de Pol I/II/III RPB8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de POLR2H pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Pol I/II/III RPB8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Pol I/II/III RPB8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus POLR2H. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Pol I/II/III RPB8 plasmide HDR (h) et le Pol I/II/III RPB8 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie POLR2H pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles POLR2H définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.