Podocin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400930

概要

NPHS2はポドサイトン（podocin）をコードしており、ポドサイトに存在するスリット膜の必須タンパク質として、糸球体濾過障壁でシグナル伝達複合体の足場（スキャフォールド）を形成します。ポドサイトンはネフリンおよびCD2APと相互作用し、脂質ラフト微小ドメインの組織化を助けることで、細胞骨格ダイナミクス、メカノセンシング、ならびに足突起構造の維持を支えます。NPHS2の破綻はスリット膜の完全性を損ない、アクチン再構成や細胞生存に関連するポドサイトのシグナル伝達経路を変化させます。ポドサイトンの遺伝学的・機能的異常は、ステロイド抵抗性ネフローゼ症候群や巣状分節性糸球体硬化症を含む蛋白尿性腎疾患と強く関連しており、NPHS2は糸球体バリア機能障害のモデル化における重要な標的となります。

Podocin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNPHS2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NPHS2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NPHS2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Podocinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Podocinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NPHS2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Podocinの機能に不可欠なNPHS2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NPHS2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Podocin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPodocin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NPHS2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Podocin HDRプラスミド（h）および Podocin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNPHS2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNPHS2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。