Plásmido Doble Nickase (h) PMCA3: sc-404464-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PMCA3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PMCA3 (h) y el plásmido de doble nickasa PMCA3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ATP2B3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PMCA3 Anticuerpo (G-6): sc-390148
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PMCA3 | sc-404464-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PMCA3 | sc-404464-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano ATP2B3 codifica la ATPasa transportadora de Ca2+ de la membrana plasmática 3 (PMCA3), una ATPasa de tipo P que exporta Ca2+ citosólico para mantener niveles basales bajos de calcio y modular los transitorios de Ca2+ inducidos por estímulos. Al restablecer la homeostasis de Ca2+ tras eventos de señalización, PMCA3 contribuye a regular procesos dependientes del calcio, como la excitabilidad, la secreción, las respuestas transcripcionales y las vías de supervivencia celular. La actividad de PMCA3 se integra funcionalmente con la regulación por calmodulina y con redes más amplias de señalización de Ca2+, como las vías calcineurina/NFAT y las mediadas por CaMK. La disrupción genética o la expresión alterada de ATP2B3 se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neurológicos, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de defectos en el manejo del calcio.
PMCA3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP2B3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP2B3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP2B3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP2B3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.