Partículas Lentivirales de Activación (m) Plfr: sc-422306-LAC

Prl7d1 codifica la proteína del ratón de la familia de la prolactina 7, subfamilia d, miembro 1 (Plfr), un factor secretado de tipo citocina asociado principalmente a tejidos reproductivos y a la biología placentaria. Como parte de la familia ampliada de genes de prolactina en roedores, Plfr se vincula con la comunicación endocrina-paracrina que favorece la diferenciación del trofoblasto, la remodelación de la interfaz útero‑placentaria y las adaptaciones materno‑fetales. La señalización de la familia de la prolactina se cruza con programas transcripcionales regulados por JAK/STAT y con procesos inflamatorios y metabólicos más amplios que moldean la fisiología del embarazo. La expresión alterada de genes placentarios de la familia de la prolactina se estudia con frecuencia en el contexto de fallos de implantación, insuficiencia placentaria, restricción del crecimiento fetal y desregulación metabólica materna en modelos murinos.

Las partículas de activación lentiviral Plfr (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Prl7d1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Plfr (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Prl7d1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Plfr. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Prl7d1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.