plexin-A3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422320

Visão geral

Plxna3 codifica a plexina-A3, um recetor transmembranar para semaforinas de classe 3 que regula a orientação axonal, a migração neuronal e o padrão de arborização dendrítica por meio da sinalização semaforina–neuropilina–plexina. A plexina-A3 integra sinais que remodelam o citoesqueleto de actina e de microtúbulos através de GTPases da família Rho e efetores associados, influenciando o colapso do cone de crescimento e a motilidade direcional. Para além do sistema nervoso, a plexina-A3 tem sido associada ao controlo da adesão e do movimento celular, processos relevantes para o padrão de desenvolvimento e a organização dos tecidos. A desregulação das vias de semaforina/plexina tem sido associada a anomalias do neurodesenvolvimento e a fenótipos migratórios alterados em modelos relevantes para doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO plexin-A3 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Plxna3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Plxna3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Plxna3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína plexin-A3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Plxna3 para a investigação da sinalização de plexin-A3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Plxna3 críticos para a função plexin-A3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Plxna3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo plexin-A3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo plexin-A3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Plxna3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo plexin-A3 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR plexin-A3 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Plxna3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Plxna3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.