PLAA Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422286

Descripción general

Plaa codifica la proteína activadora de fosfolipasa A2 (PLAA), un factor citosólico conservado implicado en la señalización de fosfolípidos y la dinámica de membranas mediante la regulación de la actividad de la fosfolipasa A2 y la producción de mediadores lipídicos derivados del ácido araquidónico. PLAA contiene dominios de unión a ubiquitina y se ha relacionado con procesos de control de calidad proteica, incluido el tráfico y el recambio dependientes de ubiquitina de proteínas asociadas a la membrana. A través de estas funciones, PLAA puede influir en cascadas de señalización inflamatoria, en la organización endolisosomal y en vías de respuesta al estrés que se entrecruzan con la inmunidad innata y la homeostasis celular. La desregulación de la señalización lipídica y de la proteostasis mediada por ubiquitina es ampliamente relevante para la neuroinflamación, los fenotipos metabólicos y los procesos degenerativos, lo que convierte a Plaa en un nodo útil para estudios mecanísticos en modelos de ratón.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PLAA (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Plaa en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Plaa junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Plaa tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PLAA.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Plaa para la investigación de la señalización de PLAA, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Plaa críticos para la función de PLAA
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Plaa para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PLAA CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PLAA CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Plaa. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PLAA (m) y el plásmido HDR PLAA (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Plaa para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Plaa definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.