PKC epsilon CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400358

Übersicht

PRKCE kodiert die Proteinkinase C Epsilon (PKCε), eine diacylglycerol-responsive Serin/Threonin-Kinase, die Signale stromabwärts von GPCR- und Rezeptor-Tyrosinkinase-Signalwegen weiterleitet. PKCε reguliert Phosphorylierungsnetzwerke, die das Zellüberleben, die Proliferation, den Umbau des Zytoskeletts und die gerichtete Migration steuern, und spielt dabei eine wichtige Rolle in der MAPK/ERK-, PI3K/AKT-, NF-κB- und Fokaladhäsions-Signalgebung. In menschlichen Zellen beeinflusst PKCε zudem den Vesikeltransport und mitochondriale Stressantworten und verknüpft damit Second-Messenger-Signalgebung mit metabolischer Anpassung. Eine dysregulierte PRKCE/PKCε-Aktivität und -Expression wurde mit onkogenen Phänotypen, Mechanismen der Therapieresistenz und veränderter inflammatorischer Signalgebung in Verbindung gebracht, weshalb sie ein häufiges Ziel in Studien zur Kartierung von Signalwegen und in der funktionellen Genomik ist.

Das PKC epsilon CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PRKCE-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PRKCE-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PRKCE nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PKC epsilon-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PRKCE-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PKC epsilon-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PRKCE-Exone abzielen, die für die PKC epsilon-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PRKCE-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PKC epsilon CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PKC epsilon CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PRKCE-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PKC epsilon HDR-Plasmid (h) und PKC epsilon HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PRKCE-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PRKCE-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.