Partículas Lentivirales de Activación (h) PKC beta: sc-400263-LAC

PRKCB codifica la proteína quinasa C beta (PKCβ), una quinasa de serina/treonina sensible al diacilglicerol y al Ca²⁺ que conecta la señalización de la fosfolipasa C inducida por receptores con programas de fosforilación que controlan la proliferación, la diferenciación, la migración y la supervivencia. PKCβ actúa aguas abajo de los receptores de antígeno y de los receptores Fc para modular la activación de las células B y la señalización inmunitaria innata, y también regula respuestas endoteliales y plaquetarias mediante el control de la dinámica del citoesqueleto y la secreción. En biología del cáncer, la señalización dependiente de PRKCB converge con las salidas de las vías MAPK/ERK, NF-κB y PI3K, que influyen en transiciones de estado celular y respuestas al estrés; además, su desregulación se ha asociado con fisiopatología inflamatoria y vascular. Estas características hacen de PRKCB un nodo útil para explorar mecanismos de transducción de señales, la comunicación cruzada entre vías dependiente de la fosforilación y programas transcripcionales específicos del contexto en modelos celulares humanos.

Las partículas de activación lentiviral PKC beta (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PRKCB en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PKC beta (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PRKCB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PKC beta. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PRKCB y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.