Partículas Lentivirales de Activación (h) Pitx2: sc-401426-LAC

PITX2 codifica el factor de transcripción Pitx2 con homeodominio tipo paired, un regulador clave del patrón embrionario y la organogénesis que ayuda a especificar la asimetría izquierda‑derecha y coordina el desarrollo del corazón, el ojo, las estructuras craneofaciales y el músculo esquelético. Pitx2 integra señales aguas arriba de las vías Wnt/β‑catenina, TGF‑β/Nodal y del ácido retinoico para controlar programas transcripcionales específicos de linaje, la diferenciación celular y la morfogénesis tisular. La actividad desregulada de PITX2 se ha relacionado con malformaciones congénitas y se estudia con frecuencia en contextos como el desarrollo auricular y la susceptibilidad a arritmias, la disgenesia del segmento anterior y fenotipos craneofaciales. En biología del cáncer, la expresión de PITX2 y su regulación epigenética se han investigado por sus posibles funciones en transiciones de estado celular tumoral, redes transcripcionales asociadas a la invasión y la comunicación cruzada entre vías de señalización.

Las partículas de activación lentiviral Pitx2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PITX2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Pitx2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PITX2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Pitx2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PITX2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.