Plasmide CRISPR/Cas9 KO PIPK I α (m): sc-422243

Présentation

Le gène murin **Pip5k1a** code la **phosphatidylinositol-4-phosphate 5-kinase de type I alpha (PIPK I α)**, une kinase lipidique qui génère le **phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate (PI(4,5)P2)** à la membrane plasmique et dans des compartiments endomembranaires. Le PI(4,5)P2 soutient la signalisation dépendante des phosphoinositides et organise la dynamique du cytosquelette d’actine, le renouvellement des adhérences focales et le trafic membranaire, influençant ainsi la migration cellulaire, la cytocinèse et la transduction de signaux déclenchée par les récepteurs. En se couplant à la production de seconds messagers médiée par la PLC et à la régulation de l’axe PI3K, PIPK I α contribue à ajuster des voies contrôlant la prolifération et la survie. Une dérégulation du métabolisme des phosphoinositides et du remodelage du cytosquelette dépendant du PI(4,5)P2 est impliquée dans la biologie du cancer, la fonction des cellules immunitaires et des processus neurologiques, faisant de **Pip5k1a** un nœud utile pour des études mécanistiques de ces phénotypes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PIPK I α (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pip5k1a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pip5k1a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pip5k1a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PIPK I α.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pip5k1a pour l'étude de la signalisation de PIPK I α, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pip5k1a essentiels à la fonction de PIPK I α
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pip5k1a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PIPK I α plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PIPK I α plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pip5k1a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PIPK I α plasmide HDR (m) et le PIPK I α (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pip5k1a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pip5k1a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.