Pinin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-405373-KO-2

Descripción general

PNN codifica pinin, una proteína predominantemente nuclear enriquecida en complejos asociados a desmosomas y en dominios tipo *speckle*, donde conecta el estado de adhesión célula–célula con la organización nuclear. Pinin participa en el procesamiento del pre-ARNm al interactuar con reguladores del *splicing* y componentes del complejo de unión de exones, influyendo así en programas de *splicing* alternativo vinculados a la identidad epitelial y la diferenciación. A través de estas funciones, PNN afecta el control transcripcional y postranscripcional de genes que gobiernan la proliferación, la migración y las respuestas al estrés. Se ha informado de una expresión desregulada de PNN o de redes de *splicing* alteradas en múltiples contextos tumorales, lo que respalda su utilidad para estudiar la dinámica epitelio-mesenquimatosa y los fenotipos impulsados por el procesamiento de ARN.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Pinin (h2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PNN en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PNN junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PNN tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Pinin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PNN para la investigación de la señalización de Pinin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PNN críticos para la función de Pinin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PNN para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Pinin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Pinin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PNN. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Pinin (h) y el plásmido HDR Pinin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PNN para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PNN definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.