PIDD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403439

Übersicht

PIDD1 kodiert das p53‑induzierte Death‑Domain‑Protein PIDD, ein Signalgerüst (Scaffold), das an zellulären Stressantworten und der Regulation der Apoptose beteiligt ist. PIDD wirkt an der Bildung multiproteinärer Komplexe wie dem PIDDosom mit und verknüpft genotoxischen Stress mit der Aktivierung von Caspase‑2 sowie nachgeschalteten Entscheidungen über das Zellschicksal. Über die Apoptose hinaus wurde PIDD mit zentrosomenbezogenen Prozessen und der DNA‑Schadenssignalgebung in Verbindung gebracht, die die Zellzykluskontrolle und die genomische Stabilität beeinflussen. Eine Fehlregulation dieser Signalwege ist relevant für Studien zur Krebsbiologie, zu neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und zu weiteren Erkrankungen, bei denen Stresssignalgebung, Apoptose oder die Chromosomenintegrität gestört sind.

Das PIDD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PIDD1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PIDD1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PIDD1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PIDD-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PIDD1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PIDD-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PIDD1-Exone abzielen, die für die PIDD-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PIDD1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PIDD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PIDD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PIDD1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PIDD HDR-Plasmid (h) und PIDD HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PIDD1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PIDD1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.