Plasmide CRISPR/Cas9 KO PI 4-kinase II α (h): sc-405423

Présentation

PI4K2A code la phosphatidylinositol 4-kinase II alpha (PI 4-kinase II alpha), une kinase lipidique associée aux membranes qui génère le phosphatidylinositol 4-phosphate (PI4P) afin de soutenir la signalisation des phosphoinositides et l’identité membranaire. Le PI4P produit par PI4K2A contribue au trafic du Golgi et des endosomes, au tri médié par la clathrine, ainsi qu’à des conversions en aval des phosphoinositides qui influencent le transport des récepteurs et la dynamique de signalisation. Par ces rôles dans la biogenèse des vésicules et le remodelage membranaire, PI4K2A est pertinent pour l’étude de l’organisation des membranes internes, de la détection des nutriments et des réponses au stress. Des altérations du métabolisme des phosphoinositides et des programmes de trafic associés à PI4K2A ont été reliées à des mécanismes impliqués en cancérologie, en neurobiologie et dans les interactions hôte–pathogène.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PI 4-kinase II α (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PI4K2A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PI4K2A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PI4K2A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PI 4-kinase II α.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PI4K2A pour l'étude de la signalisation de PI 4-kinase II α, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PI4K2A essentiels à la fonction de PI 4-kinase II α
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PI4K2A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PI 4-kinase II α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PI 4-kinase II α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PI4K2A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PI 4-kinase II α plasmide HDR (h) et le PI 4-kinase II α (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PI4K2A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PI4K2A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.