PI 3-kinase p85β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401991

Descripción general

PIK3R2 codifica la subunidad reguladora p85β de la fosfoinosítido 3-quinasa (PI3K) de clase IA, que estabiliza y modula las subunidades catalíticas p110 y conecta las tirosina quinasas receptoras activadas y las proteínas adaptadoras con la señalización de PI3K. Mediante el control de la producción de PIP3, la PI 3-quinasa p85β regula AKT–mTOR y vías relacionadas que controlan el crecimiento celular, el metabolismo, la supervivencia y la dinámica del citoesqueleto. La alteración de la regulación de la vía de PI3K se ha implicado ampliamente en la señalización oncogénica, las respuestas a insulina/IGF y la función de las células inmunitarias. Dado que p85β influye tanto en la actividad basal de PI3K como en la dependiente de estímulos, se estudia con frecuencia en contextos de retroalimentación de señalización, crosstalk entre vías y reconfiguración de redes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PI 3-kinase p85β (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PIK3R2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PIK3R2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PIK3R2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PI 3-kinase p85β.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PIK3R2 para la investigación de la señalización de PI 3-kinase p85β, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PIK3R2 críticos para la función de PI 3-kinase p85β
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PIK3R2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PI 3-kinase p85β CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PI 3-kinase p85β CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PIK3R2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PI 3-kinase p85β (h) y el plásmido HDR PI 3-kinase p85β (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PIK3R2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PIK3R2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.