PI 3-kinase p85β CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401991-ACT
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PI 3-kinase p85β CRISPR Activation Plasmid (h) ist ein Transkriptionsaktivierungs System (SAM) welches für die gezielte Verstärkung der Genexpression bestimmt ist
- PI 3-kinase p85β CRISPR Aktivierungsplasmide (h) bestehen aus 3 Plasmiden im Massenverhältnis 1:1:1: ein Plasmid kodiert für die deaktivierte Cas9 (dCas9) Nuklease (D10A und N863A) fusioniert an die Transaktivierungsdomaine VP64 sowie ein Gen für die Blasticidin Resistenz; ein zweites Plasmid kodierend für das MS2-p65-HSF1 Fusionsprotein sowie ein Gen für die Hygromycin Resistenz; ein drittes Plasmid kodierd für die Ziel-spezifische 20 nt guide RNA fusioniert an zwei MS2 RNA Aptamere sowie ein Gen für die Puromycin Resistenz.
- Der entstehende SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) bindet eine sequenzspezifische Region 200-250 nt upstream (in 5'-Richtung) des Transkriptionsstartsignals und rekrutiert dort ständig Transkriptionsfaktoren für eine verstärkte Gen-Aktivierung und Gen-Expression.
- Die vom PI 3-kinase p85β CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) und vom PI 3-kinase p85β CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) kodierten gRNAs zielen auf unterschiedliche regulatorische Regionen stromaufwärts der PIK3R2-Transkriptionsstartstelle ab. Eines oder beide Designs sind möglicherweise verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PI 3-kinase p85β: sc-515646
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PI 3-kinase p85β CRISPR Activation Plasmid (h) | sc-401991-ACT | 20 µg | $397.00 |
PIK3R2 kodiert die regulatorische Untereinheit p85β der Phosphoinositid‑3‑Kinase (PI3K) der Klasse IA, einen zentralen Vermittler der Rezeptor‑Tyrosinkinase‑ sowie Insulin/IGF‑Signalübertragung. Durch Stabilisierung und Modulation der katalytischen p110‑Isoformen trägt die PI3‑Kinase‑Untereinheit p85β zur Kontrolle der PIP3‑Produktion und der nachgeschalteten Aktivität des AKT‑mTOR‑Signalwegs bei und beeinflusst damit Zellwachstum, Überleben, Stoffwechsel und Zytoskelettdynamik. Eine veränderte Regulation des PI3K‑Signalwegs ist breit in der Krebsbiologie, Neuroentwicklung und Immun‑Signalgebung involviert, wodurch PIK3R2 einen wichtigen Knotenpunkt zur Analyse von Rückkopplungen und Signalstärke im Signalweg darstellt. Auch die Expression von PIK3R2 und seine regulatorischen Interaktionen sind relevant für Studien zur Insulinsensitivität, Migration und Stressantwort‑Signalgebung in menschlichen Zellen.
PI 3-kinase p85β Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PIK3R2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.
PI 3-kinase p85β Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PIK3R2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.
Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PIK3R2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PI 3-kinase p85β-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PIK3R2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PI 3-kinase p85β-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PI 3-kinase p85β-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PIK3R2-Ausdruck.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.