PHC3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406576

Panoramica

PHC3 (polyhomeotic homolog 3) è un componente centrale del complesso repressivo Polycomb 1 (PRC1) che contribuisce alla compattazione della cromatina e al silenziamento trascrizionale stabile di geni dello sviluppo e dell’identità cellulare. Attraverso la regolazione epigenetica dipendente da Polycomb, PHC3 partecipa al mantenimento dei programmi di linea cellulare e alla regolazione della proliferazione, modellando stati di cromatina repressiva legati all’ubiquitinazione degli istoni. Un’attività Polycomb alterata e una repressione deregolata associata a PRC1 sono spesso implicate in programmi trascrizionali oncogeni e in una differenziazione aberrante, rendendo PHC3 rilevante per gli studi di biologia tumorale e di controllo epigenetico. La funzione di PHC3 viene inoltre utilizzata come indicatore per comprendere come i regolatori della cromatina coordinino le reti geniche durante lo sviluppo e in risposta allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PHC3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PHC3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PHC3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PHC3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PHC3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PHC3 per lo studio della segnalazione di PHC3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PHC3 critici per la funzione di PHC3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PHC3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PHC3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PHC3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PHC3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PHC3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PHC3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PHC3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PHC3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.