PH-4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409966

Visão geral

P4HTM codifica a proteína transmembranar prolyl 4-hidroxilase (PH-4), uma dioxigenase associada ao retículo endoplasmático que catalisa a hidroxilação de prolina em substratos específicos, ligando a disponibilidade de oxigênio e de cofatores metabólicos à modificação pós-traducional de proteínas. Como membro da família das prolyl 4-hidroxilases, a PH-4 está posicionada para influenciar o dobramento proteico, a estabilidade e os processos de controle de qualidade na via secretora, com efeitos a jusante nas respostas ao estresse celular e na proteostase. A atividade de P4HTM tem sido associada à biologia de detecção de oxigênio e à regulação da sinalização responsiva à hipóxia, integrando-se a vias que moldam a adaptação celular à redução da tensão de oxigênio. Estudos genéticos e funcionais implicaram P4HTM em fenótipos relevantes para doenças que afetam o neurodesenvolvimento e a homeostase metabólica, tornando-o um alvo para estudos mecanísticos em sistemas celulares humanos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PH-4 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene P4HTM em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do P4HTM, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do P4HTM na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PH-4.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de P4HTM para a investigação da sinalização de PH-4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) P4HTM críticos para a função PH-4
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos P4HTM para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PH-4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PH-4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus P4HTM. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PH-4 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PH-4 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia P4HTM para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo P4HTM definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.