Peroxin 10 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406226

Descripción general

PEX10 codifica la peroxina 10, una ligasa E3 de ubiquitina con dominio RING finger incrustada en la membrana peroxisomal, esencial para la biogénesis de los peroxisomas y la importación de proteínas a la matriz. Como parte de la maquinaria de ubiquitinación peroxisomal junto con PEX2 y PEX12, PEX10 ayuda a regular el reciclaje del receptor de importación PEX5 y sostiene vías metabólicas peroxisomales, incluida la β-oxidación de ácidos grasos de cadena muy larga y la homeostasis de especies reactivas de oxígeno. La alteración de PEX10 dificulta el ensamblaje de los peroxisomas y compromete el metabolismo lipídico y el equilibrio redox, procesos centrales en las respuestas celulares al estrés y en la comunicación entre orgánulos. Las variantes patogénicas en PEX10 se asocian con trastornos de la biogénesis peroxisomal dentro del espectro de Zellweger, lo que lo convierte en una diana relevante para estudiar mecanismos de disfunción orgánular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Peroxin 10 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PEX10 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PEX10 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PEX10 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Peroxin 10.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PEX10 para la investigación de la señalización de Peroxin 10, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PEX10 críticos para la función de Peroxin 10
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PEX10 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Peroxin 10 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Peroxin 10 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PEX10. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Peroxin 10 (h) y el plásmido HDR Peroxin 10 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PEX10 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PEX10 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.