Particules Lentivirales d'Activation (h) Per1: sc-401260-LAC

PER1 humain (Period Circadian Regulator 1) code Per1, un composant central de l’horloge circadienne moléculaire qui contribue à générer des rythmes d’environ 24 heures via des boucles de rétroaction transcriptionnelles et traductionnelles impliquant CLOCK/ARNTL (BMAL1), les protéines CRY et d’autres membres de la famille PER. Per1 module le contrôle circadien de la progression du cycle cellulaire, des réponses aux dommages de l’ADN, de l’expression de gènes métaboliques et de la signalisation endocrine, en façonnant des programmes transcriptionnels rythmiques dans de nombreux tissus. Une activité PER1 dérégulée et une désynchronisation circadienne ont été associées à des altérations de la régulation veille–sommeil et, plus largement, à des phénotypes métaboliques et neuropsychiatriques, ainsi qu’à des processus oncogéniques dans lesquels des points de contrôle et des voies de stress régulés par l’horloge sont perturbés. La recherche sur PER1 est donc pertinente pour des études de chronobiologie, de régulation transcriptionnelle et de réponses cellulaires au stress dépendantes du timing dans des systèmes modèles humains.

Les particules d'activation lentivirales Per1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PER1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Per1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PER1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Per1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PER1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.