PECI Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406564

Visão geral

ECI2 codifica a isomerase peroxissomal D3,D2-enoil-CoA (PECI), uma enzima auxiliar necessária para a β-oxidação peroxissomal de acil-CoAs de ácidos graxos insaturados. A PECI catalisa etapas de isomerização que permitem a continuidade do encurtamento da cadeia e a coordenação com reações subsequentes de desidrogenação e tiólise, sustentando o catabolismo lipídico e a homeostase energética celular. Por meio de seu papel no metabolismo peroxissomal de ácidos graxos, a ECI2 contribui para a regulação da sinalização lipídica, do equilíbrio redox e da adaptação metabólica sob estresse nutricional. A desregulação da β-oxidação peroxissomal e do processamento de ácidos graxos insaturados é relevante para mecanismos de doenças metabólicas, fenótipos de armazenamento de lipídios e remodelamento metabólico mais amplo observado em contextos de pesquisa em câncer e neurodegeneração.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PECI (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ECI2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ECI2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ECI2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PECI.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ECI2 para a investigação da sinalização de PECI, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ECI2 críticos para a função PECI
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ECI2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PECI Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PECI Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ECI2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PECI Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PECI (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ECI2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ECI2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.