Plasmide CRISPR/Cas9 KO PECI (h): sc-406564

Présentation

ECI2 code l’isomérase peroxysomale D3,D2-enoyl-CoA (PECI), une enzyme auxiliaire nécessaire à la β‑oxydation peroxysomale des acyl‑CoA d’acides gras insaturés. PECI catalyse des étapes d’isomérisation qui permettent la poursuite du raccourcissement de la chaîne et la coordination avec les réactions en aval de déshydrogénation et de thiolyse, soutenant ainsi le catabolisme des lipides et l’homéostasie énergétique cellulaire. Par son rôle dans le métabolisme des acides gras dépendant des peroxysomes, ECI2 contribue à la régulation de la signalisation lipidique, de l’équilibre rédox et de l’adaptation métabolique en situation de stress nutritionnel. La dérégulation de la β‑oxydation peroxysomale et du traitement des acides gras insaturés est pertinente pour les mécanismes des maladies métaboliques, les phénotypes de stockage lipidique et le remodelage métabolique plus large observé dans les contextes de recherche sur le cancer et la neurodégénérescence.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PECI (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ECI2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ECI2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ECI2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PECI.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ECI2 pour l'étude de la signalisation de PECI, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ECI2 essentiels à la fonction de PECI
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ECI2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PECI plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PECI plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ECI2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PECI plasmide HDR (h) et le PECI (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ECI2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ECI2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.