Plasmide Double Nickase (h) PDZ-RhoGEF: sc-403444-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PDZ-RhoGEF correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PDZ-RhoGEF Double Nickase (h) et le plasmide PDZ-RhoGEF Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ARHGEF11. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PDZ-RhoGEF Antibody (D-9): sc-166740
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PDZ-RhoGEF | sc-403444-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PDZ-RhoGEF | sc-403444-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARHGEF11 code PDZ-RhoGEF, un facteur d’échange de nucléotides guanyliques spécifique de RhoA qui relie la signalisation des GPCR couplés à Gα12/13 activés à l’activation des GTPases Rho et à la contractilité actomyosine en aval. En régulant le remodelage du cytosquelette, la formation de fibres de stress, la dynamique des adhérences focales et la polarité cellulaire, PDZ-RhoGEF influence des processus tels que la migration, l’adhésion et la fonction de barrière épithéliale. L’échafaudage médié par le domaine PDZ et les interactions croisées de signalisation intègrent des signaux issus des récepteurs et des complexes jonctionnels afin d’ajuster la sortie de la voie Rho/ROCK. Une signalisation RhoA dérégulée et des altérations du réseau associé à ARHGEF11 ont été impliquées dans des phénotypes pathologiques de motilité et d’invasion cellulaires, ainsi que dans des changements plus larges de signalisation pertinents pour la maladie, dans des contextes cancéreux et inflammatoires.
PDZ-RhoGEF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARHGEF11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARHGEF11. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARHGEF11. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARHGEF11.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.