Plasmide CRISPR d'Activation (h) PDGF-A: sc-400711-ACT

PDGFA code le facteur de croissance dérivé des plaquettes A (PDGF-A), un ligand dimérique sécrété qui transmet ses signaux principalement via PDGFRα afin de réguler la prolifération, la survie et la migration dirigée des cellules mésenchymateuses. PDGF-A contribue à la morphogenèse du développement et au remodelage tissulaire en activant des cascades de signalisation de récepteurs à activité tyrosine kinase, telles que RAS–MAPK, PI3K–AKT et des voies dépendantes de PLCγ. Dans les tissus adultes, une signalisation PDGF-A/PDGFR dérégulée est associée à une activation stromale aberrante, à l’expansion des fibroblastes et au remodelage de la matrice extracellulaire, qui influencent l’inflammation et les interactions tumeur–stroma. L’expression de PDGFA est donc fréquemment étudiée dans des contextes impliquant des programmes angiogéniques et fibrotiques, la réparation des plaies et des modifications de l’état cellulaire induites par des facteurs de croissance.

PDGF-A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PDGFA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PDGF-A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PDGFA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PDGFA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PDGF-A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PDGFA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PDGF-A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PDGF-A dans les cellules tumorales présentant une expression de PDGFA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.