Plásmido Doble Nickase (h) PDE5A: sc-401627-NIC

PDE5A codifica la fosfodiesterasa 5A, una fosfodiesterasa específica de cGMP que termina la señalización óxido nítrico–cGMP al hidrolizar el GMP cíclico a GMP. Al controlar los niveles de cGMP, PDE5A regula la actividad de la proteína quinasa G (PKG) y procesos posteriores, incluidos el tono del músculo liso, la reactividad vascular, la función plaquetaria y las respuestas de remodelado cardíaco. La actividad de PDE5A se vincula a redes de señalización que integran la salida de la guanilato ciclasa con el manejo del calcio y la dinámica del citoesqueleto, lo que influye en la contractilidad y la proliferación celulares. La expresión desregulada de PDE5A o los desequilibrios en su señalización se han investigado en la fisiopatología cardiovascular y vascular pulmonar, en el remodelado asociado a fibrosis y en otros contextos en los que la alteración de la homeostasis del cGMP contribuye a fenotipos relevantes para la enfermedad.

PDE5A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PDE5A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PDE5A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PDE5A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PDE5A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.