Pbx 2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402015-ACT

PBX2 kodiert den TALE-Homeobox-Transkriptionsfaktor Pbx2, einen DNA-bindenden Kofaktor, der mit HOX- und MEIS-Proteinen zusammenwirkt, um entwicklungsbezogene Genexpressionsprogramme festzulegen und die Zellidentität aufrechtzuerhalten. Über diese Komplexe trägt PBX2 zu einer chromatinassoziierten transkriptionellen Regulation bei, die Differenzierung, Proliferation und Lineage-Festlegung in zahlreichen Geweben beeinflusst. Eine fehlregulierte PBX2-Aktivität sowie veränderte HOX–PBX-Transkriptionsnetzwerke wurden mit onkogenen Transkriptionsprogrammen und Kontexten der Tumorprogression in Verbindung gebracht, was seine Untersuchung in der Krebsbiologie und der entwicklungsbiologischen Genregulation unterstützt. PBX2 wird außerdem als Knotenpunkt genutzt, um die Kooperativität von Transkriptionsfaktoren und die Logik von Enhancern in menschlichen Zellen zu untersuchen.

Pbx 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PBX2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Pbx 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PBX2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PBX2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Pbx 2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PBX2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Pbx 2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Pbx 2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PBX2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.