Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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paxillin Double Nickase Plasmid (m): sc-422546-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das paxillin Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- paxillin Double-Nickase-Plasmid (m) und paxillin Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Pxn abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: paxillin: sc-365379
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
paxillin Double Nickase Plasmid (m) | sc-422546-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
paxillin Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422546-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen *Pxn* kodiert Paxillin, ein multidomäniges Adaptorprotein in Fokalkontakten, das integrinabhängige Signalwege und den Umbau des Aktin-Zytoskeletts während Zelladhäsion, Ausbreitung (Spreading) und Migration koordiniert. Paxillin dient als Gerüstprotein für Kinasen und Regulatoren von GTPasen und integriert Signale von FAK/SRC sowie nachgeschalteten RHO-Familien‑Signalwegen, um den Turnover von Fokalkontakten und die Mechanotransduktion zu steuern. Über diese Funktionen beeinflusst es die Wahrnehmung der extrazellulären Matrix, die Dynamik von Lamellipodien und die Zellpolarität. Eine fehlregulierte Paxillin-Signalübertragung und ein gestörter Umbau von Fokalkontakten werden in krankheitsrelevanten Modellen häufig mit veränderter Motilität und invasiven Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch *Pxn* ein nützlicher Knotenpunkt für die Untersuchung adhäsionsassoziierter Signalnetzwerke ist.
paxillin Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Pxn-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Pxn abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Pxn-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Pxn-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.