Plásmido CRISPR de Activación (m) Pax-6: sc-422119-ACT

El Pax6 de ratón codifica el factor de transcripción Pax-6, un regulador de unión al ADN con dominios paired box/homeobox que orquesta programas de expresión génica necesarios para el desarrollo del ojo, el prosencéfalo y el compartimento endocrino del páncreas. Pax-6 se integra con redes de señalización del desarrollo, incluidas Wnt, Shh, BMP/TGF-β y Notch, para controlar la especificación de progenitores, el compromiso de linaje y la diferenciación neuronal. Alteraciones en la dosis de Pax6 o en su actividad reguladora perturbAN el patrón del desarrollo y se han asociado con malformaciones oculares congénitas, defectos del neurodesarrollo y disfunción endocrina en sistemas modelo. Como regulador maestro, Pax-6 se utiliza con frecuencia para estudiar la lógica cisreguladora, las transiciones del estado de la cromatina y los circuitos transcripcionales que sustentan las decisiones de destino celular.

Pax-6 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Pax6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Pax-6 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Pax6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Pax6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Pax-6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Pax6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Pax-6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Pax-6 en células tumorales con expresión de Pax6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.