PATZ1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404881-ACT

PATZ1 (POZ/BTB e zinc finger 1 contenente un dominio AT-hook) è un regolatore trascrizionale umano che si lega a DNA ricco in AT e modula programmi di espressione genica che controllano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e l’apoptosi. Attraverso il suo dominio BTB/POZ e i motivi a dita di zinco, PATZ1 partecipa alla regolazione associata alla cromatina e può influenzare reti collegate alla staminalità, alla definizione dei pattern di sviluppo e alle risposte allo stress. Un’attività deregolata di PATZ1 è stata associata a stati trascrizionali alterati osservati in molteplici contesti patologici, inclusa la biologia del cancro, dove può influire sulla proliferazione e sull’identità di linea cellulare. In quanto fattore nucleare con un ampio raggio d’azione regolatorio, PATZ1 è frequentemente studiato nel controllo trascrizionale, nella regolazione epigenetica e nella rimodulazione delle vie di segnalazione in risposta a stimoli oncogenici o di differenziamento.

PATZ1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PATZ1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PATZ1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PATZ1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PATZ1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PATZ1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PATZ1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PATZ1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PATZ1 nelle cellule tumorali con espressione di PATZ1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.