Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
patched/PTCH1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400457
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- patched/PTCH1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico patched/PTCH1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: patched/PTCH1 Anticuerpo (A-2): sc-518044
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
patched/PTCH1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400457 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PTCH1 codifica patched, un receptor transmembrana de 12 pasos que restringe la señalización Hedgehog al inhibir a SMO en ausencia de ligando. La unión de Sonic/Indian/Desert Hedgehog alivia esta represión, lo que permite programas de transcripción dependientes de GLI que gobiernan el patrón embrionario, la homeostasis tisular y las decisiones de destino celular. La actividad de PTCH1 conecta el transporte de esteroles en la membrana y el tráfico ciliar con la salida de la vía, integrando señales que modulan la proliferación y la diferenciación. La desregulación de la señalización PTCH1–Hedgehog se ha implicado en trastornos del desarrollo y procesos oncogénicos, lo que convierte a PTCH1 en un nodo clave para estudios de la vía y de relaciones genotipo–fenotipo.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO patched/PTCH1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PTCH1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PTCH1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PTCH1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína patched/PTCH1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PTCH1 para la investigación de la señalización de patched/PTCH1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PTCH1 críticos para la función de patched/PTCH1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PTCH1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido patched/PTCH1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido patched/PTCH1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PTCH1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR patched/PTCH1 (h) y el plásmido HDR patched/PTCH1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PTCH1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PTCH1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.