PAR4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-431134

概要

マウスの **Pawr** は、PAR4（prostate apoptosis response 4）をコードしており、プロリンに富みロイシンジッパー構造を含むタンパク質で、細胞運命の決定を制御する転写プログラムを調節します。PAR4はアポトーシスシグナルを促進し、NF-κB活性に影響する相互作用や、PKC依存性応答などのプロテインキナーゼシグナル伝達カスケードを含む生存促進経路に拮抗し得ます。また、シグナル伝達複合体の足場（スキャフォールド）として機能し、遺伝子発現を制御する能力を通じて、細胞ストレス応答、分化、細胞骨格制御にも関与することが示されています。PAWR/PAR4活性の異常は、がん生物学におけるアポトーシス閾値の変化や、ストレス誘導性の細胞死および生存シグナルが攪乱される炎症・神経変性に関連した過程と関連づけられています。

PAR4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPawr遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pawr内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pawrのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PAR4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PAR4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pawr欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PAR4の機能に不可欠なPawrエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pawrゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PAR4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPAR4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pawr遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PAR4 HDRプラスミド（m）および PAR4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPawrホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPawr標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。