Plasmide CRISPR/Cas9 KO PAR4 (m): sc-431134

Présentation

Mouse Pawr code pour PAR4 (prostate apoptosis response 4), une protéine riche en proline contenant un motif « leucine zipper », qui module des programmes transcriptionnels contrôlant les décisions de destinée cellulaire. PAR4 favorise la signalisation apoptotique et peut antagoniser les voies pro-survie, notamment via des interactions influençant l’activité de NF-κB et des cascades de signalisation de kinases telles que les réponses dépendantes de la PKC. Elle a été associée aux réponses au stress cellulaire, à la différenciation et à la régulation du cytosquelette grâce à sa capacité à servir d’échafaudage à des complexes de signalisation et à réguler l’expression génique. Une activité PAWR/PAR4 dérégulée a été associée à une modification des seuils d’apoptose en cancérologie, ainsi qu’à des processus liés à l’inflammation et à la neurodégénérescence, dans lesquels la mort cellulaire induite par le stress et les signaux de survie sont perturbés.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PAR4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pawr dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pawr, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pawr à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PAR4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pawr pour l'étude de la signalisation de PAR4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pawr essentiels à la fonction de PAR4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pawr pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PAR4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PAR4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pawr. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PAR4 plasmide HDR (m) et le PAR4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pawr pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pawr définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.