PAK4 Plasmide Double Nickase (h): sc-401895-NIC

PAK4 codifica la p21-activated kinase 4, una chinasi serina/treonina che agisce a valle delle GTPasi della famiglia Rho, come Cdc42, per coordinare il rimodellamento del citoscheletro, la polarità cellulare e la migrazione direzionale. La segnalazione di PAK4 interagisce con vie che controllano il turnover delle adesioni focali, la dinamica dell’actina e segnali pro-sopravvivenza, influenzando processi quali la crescita dipendente dall’adesione e il comportamento invasivo. Attraverso la fosforilazione di substrati citoscheletrici e regolatori, PAK4 contribuisce alla regolazione della resistenza all’apoptosi e della progressione del ciclo cellulare. Un’espressione o un’attività deregolata di PAK4 è stata associata a contesti di segnalazione oncogenica e a fenotipi metastatici, rendendolo un bersaglio frequente negli studi sulla motilità delle cellule tumorali e sui meccanismi di sopravvivenza.

PAK4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PAK4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PAK4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PAK4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PAK4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.