Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
PAC-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401917
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PAC-1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PAC-1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PAC-1 Anticuerpo (4O21): sc-32776
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PAC-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401917 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La fosfatasa de especificidad dual 2 (DUSP2), también conocida como PAC-1, es una fosfatasa de quinasas MAP que desfosforila ERK1/2 y p38 activadas, moldeando así la magnitud y la duración de la señalización MAPK. En contextos inmunitarios y hematopoyéticos humanos, DUSP2 contribuye al control dependiente del estímulo de programas transcripcionales impulsados por citocinas, la proliferación y la apoptosis al actuar como regulador de retroalimentación negativa de las cascadas MAPK. Su expresión suele ser inducible en linfocitos activados y puede modular vías posteriores vinculadas a la señalización inflamatoria y a respuestas al estrés. La actividad o expresión desregulada de DUSP2 se ha asociado con disfunción inmunitaria y fenotipos de señalización relacionados con el cáncer, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos del control de la vía MAPK.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PAC-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DUSP2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DUSP2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DUSP2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PAC-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DUSP2 para la investigación de la señalización de PAC-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de DUSP2 críticos para la función de PAC-1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DUSP2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PAC-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PAC-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DUSP2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PAC-1 (h) y el plásmido HDR PAC-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DUSP2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DUSP2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.