Plásmido Doble Nickase (h) p73: sc-416822-NIC

TP73 codifica p73, un factor de transcripción de la familia p53 que regula el control del ciclo celular, la apoptosis y los programas de diferenciación en respuesta al estrés celular y a señales del desarrollo. Mediante actividades específicas de isoforma, p73 influye en la señalización del daño en el ADN, la apoptosis mitocondrial y las redes transcripcionales que gobiernan la integridad epitelial y el desarrollo neural. La función de p73 se cruza con vías como las respuestas mediadas por ATM/ATR y la regulación cruzada dentro de la familia p53, moldeando resultados que incluyen la senescencia y la supervivencia. La expresión desregulada de TP73 o el desequilibrio entre isoformas se ha asociado con procesos oncogénicos, fenotipos del neurodesarrollo y una adaptación alterada al estrés, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos del control transcripcional.

p73 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TP73 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TP73. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TP73. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TP73 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.