Plasmide CRISPR d'Activation (h) p35: sc-400431-ACT

Le gène humain **CDK5R1** code **p35**, une sous-unité régulatrice enrichie dans les neurones qui se lie à la kinase dépendante des cyclines 5 (**CDK5**) et l’active, modulant une activité kinase essentielle au développement neuronal et à la fonction synaptique. Le complexe **CDK5–p35** coordonne des processus tels que la croissance des neurites, la migration neuronale, le remodelage du cytosquelette et la signalisation dépendante de l’activité, via la phosphorylation de substrats qui influencent la dynamique des microtubules et le trafic vésiculaire. Une homéostasie dérégulée de **CDK5R1/p35**, incluant une protéolyse altérée et une signalisation CDK5 aberrante, a été associée à des phénotypes neurodégénératifs et neurodéveloppementaux et est fréquemment étudiée dans des modèles de stress neuronal et de dysfonction synaptique. En tant que nœud de voie reliant la signalisation dépendante du calcium à des sorties cytosquelettiques et transcriptionnelles, **p35** constitue un levier expérimental pertinent pour des études mécanistiques dans des systèmes neuronaux et gliaux.

p35 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDK5R1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

p35 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDK5R1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDK5R1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de p35. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDK5R1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de p35 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie p35 dans les cellules tumorales présentant une expression de CDK5R1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.