Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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p107 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422614
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- p107 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico p107, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: p107 Anticuerpo (SD9): sc-250
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
p107 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422614 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Rbl1 de ratón codifica la proteína p107 de la familia del retinoblastoma, un regulador del ciclo celular que frena la progresión de G1 a S al unirse a factores de transcripción E2F y coordinar la señalización de quinasas dependientes de ciclina. p107 integra señales mitogénicas con el control transcripcional de la replicación del ADN y la entrada en fase S, y contribuye a la imposición de puntos de control y a programas de diferenciación celular. Como parte de la vía de RB, la función de p107 se entrecruza con las redes de pRB/p130 para modular la represión asociada a la cromatina y las decisiones de proliferación. La desregulación del control de la familia RB y de la actividad de E2F es ampliamente relevante para modelos de transformación oncogénica y para estudios de proliferación aberrante y compromiso de linaje en tejidos de mamíferos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO p107 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rbl1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rbl1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rbl1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína p107.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rbl1 para la investigación de la señalización de p107, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Rbl1 críticos para la función de p107
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rbl1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido p107 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido p107 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rbl1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR p107 (m) y el plásmido HDR p107 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rbl1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rbl1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.