Plasmide CRISPR/Cas9 KO Oxytocin-R (h): sc-400641

Présentation

OXTR code le récepteur humain de l’ocytocine (Oxytocin-R), un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) qui se couple principalement à Gq/11 pour activer la phospholipase C, la production d’inositol trisphosphate (IP3) et la mobilisation du Ca2+ intracellulaire, avec en complément, selon le contexte, une signalisation via les voies MAPK/ERK et PI3K. Oxytocin-R régule la contractilité des muscles lisses, la sécrétion neuroendocrinienne et la signalisation synaptique qui influencent le comportement social et les réponses au stress. Dans des contextes immunitaires et stromaux, la signalisation d’OXTR peut moduler la libération de cytokines, la migration cellulaire et les programmes de remodelage tissulaire. Des altérations de l’expression ou de la signalisation d’OXTR ont été étudiées dans des phénotypes neurodéveloppementaux et psychiatriques, des troubles de la biologie de la reproduction, ainsi que dans des cancers où des voies dépendantes des RCPG contribuent à la prolifération et aux interactions avec le microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Oxytocin-R (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène OXTR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du OXTR, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert OXTR à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Oxytocin-R.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en OXTR pour l'étude de la signalisation de Oxytocin-R, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de OXTR essentiels à la fonction de Oxytocin-R
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de OXTR pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Oxytocin-R plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Oxytocin-R plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus OXTR. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Oxytocin-R plasmide HDR (h) et le Oxytocin-R (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie OXTR pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles OXTR définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.