ORP150 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419398

Descripción general

Hyou1 codifica ORP150 (también conocida como proteína 1 inducida por hipoxia), una chaperona de la familia HSP70 residente en el retículo endoplásmico que favorece el plegamiento de proteínas y el control de calidad durante la hipoxia, la privación de glucosa y otros tipos de estrés celular. ORP150 actúa dentro de las redes de proteostasis del RE, coordinándose con vías de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) como PERK–eIF2α, IRE1–XBP1 y ATF6 para limitar la acumulación de proteínas mal plegadas y mantener la integridad de la vía secretora. En modelos murinos y sistemas celulares, las alteraciones en la actividad de ORP150 se han asociado con mecanismos de adaptación al estrés que afectan la supervivencia celular, la inflamación y la homeostasis metabólica. La desregulación del manejo del estrés del RE y de la proteostasis es relevante para estudios sobre lesión isquémica, neurodegeneración y biología del microambiente tumoral, donde la hipoxia y el estrés proteotóxico son destacados.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ORP150 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Hyou1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Hyou1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Hyou1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ORP150.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Hyou1 para la investigación de la señalización de ORP150, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Hyou1 críticos para la función de ORP150
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Hyou1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ORP150 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ORP150 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Hyou1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ORP150 (m) y el plásmido HDR ORP150 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Hyou1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Hyou1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.