Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Nur77 Plasmide Double Nickase (m): sc-420884-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Nur77 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Nur77 Double Nickase Plasmid (m) e il Nur77 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Nr4a1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Nur77 Antibody (C-5): sc-365113
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Nur77 Plasmide Double Nickase (m) | sc-420884-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nur77 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-420884-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Nr4a1 codifica per il recettore nucleare orfano Nur77 (NR4A1), un fattore di trascrizione a risposta immediata che integra segnali derivanti dall’attivazione del recettore dei linfociti T, dalle cascate MAPK e dai programmi infiammatori associati a NF-κB. Nur77 regola reti geniche che controllano la selezione negativa dei timociti, l’anergia dei linfociti T periferici, la polarizzazione dei macrofagi e l’adattamento metabolico, con effetti dipendenti dal contesto su apoptosi e vie mitocondriali. Nel sistema nervoso viene indotto rapidamente dall’attività neuronale e dagli ormoni dello stress, collegando la segnalazione calcio-dipendente alle risposte trascrizionali. Una segnalazione di NR4A1 deregolata è stata implicata in modelli di autoimmunità e infiammazione cronica, aterosclerosi, programmi di sopravvivenza delle cellule tumorali e processi neuroinfiammatori e neurodegenerativi.
Nur77 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Nr4a1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Nr4a1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Nr4a1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Nr4a1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.